Расплавляют агар Мартена при 90оС в водной бане. Охлаждают до 50вЃ° С и добавляют 20 % сыворотки крови КРС. Смесь перемешивают и выливают в чашку Петри, давая ей равномерно. Чумной микроб является факультативным анаэробом. Растет на простых питательных средах (МПА, МПБ, агар Хоттингера, агар Мартена) при рН 6,9-7,2. Оптимальная температура роста. Агар для подсчета микроорганизмов в воде, 500 г/уп. For potato dextrose salt agar, prepare potato dextrose agar, as above, and add 75 g NaCl per liter. For cosmetics, cool medium to 47-50°C after autoclaving.
Солевой агар с маннитом (агар Чапмана агар)(Mannitol salt agar)(500 г.) 51053
Агар Мартена. Добавление 2 % агара обеспечивает получение плотной среды. Бульон Хоттингера. Готовят из триптического гидро-лизата (перевара) мясных отходов—фасций, жира. Чумной микроб является факультативным анаэробом. Растет на простых питательных средах (МПА, МПБ, агар Хоттингера, агар Мартена) при рН 6,9-7,2. Оптимальная температура роста. В бульон Хоттингера, подогретый до температуры 50-60°С, вносят мелко нарезанный хорошо промытый агар из расчета (по мере необходимости) 15,0-25,0 г на 1000,0 мл. Бактериологический метод. — Посевы исследуемого материала на агар Хоттингера, либо Мартена. — Инкубацию посевов проводят при 28 С — в положительных случаях через 12 часов.
Вы точно человек?
Известно, что включение радиоактивных меток в углекислоту наблюдается при распаде 1С14 -- глюкозы по гексозо-монофосфатному пути ГМФП. Точкой образования радиоактивного СО2 является реакция декарбоксилирования 6-фосфоглюконата, образующегося из глюкозо-6-фосфата. Использование в опыте 6С14 - глюкозы приводит к тому, что это атом, также как и первый в отличие от остальных атомов при распаде карбогидрата по пути Эмбдена-Мейергофа попадает в метильную группу пирувата, и при дальнейшем метаболизме в цикле Кребса судьба шестого атома углерода аналогична судьбе первого. Однако при распаде 6С14- глюкозы по ГМФП включение метки в СО2 на происходит, так как при декарбоксилировании 6-фосфоглюконата шестой углеродный атом переходит в состав рибулозо-5-фосфата. Обычно одинаковая радиоактивность СО2 наблюдается при диссимиляции 1С14 - и 6С14- глюкозы и указывает на расщепление молекул карбогидрата по пути Эбдена-Мейергофа гликолиза с последующей утилизацией продуктов распада в цикле Кребса цикле ди- и трикарбоновых кислот. Результаты изучения путей диссимиляции глюкозы исходных, переходных и НФ холерных вибрионов с использованием глюкозы, меченой по первому или шестому атомам, представлены в Таблице 1.
Изучение динамики изменений катаболизма глюкозы в клетках холерных вибрионов, пребывающих в микрокосмах, показало, что в популяциях, в которых 102- 103 м. Также как и в исходных культурах, в переходных и НФ уровень радиоактивности СО2, выделенного в результате катаболизма глюкозы, меченой по первому и шестому атомам, был приблизительно равным. Таблица 1. Радиоактивность выделенного СО2 при диссимиляции глюкозы некультивируемыми штаммами V.
Сдерживая скопление Proteus, этот компонент дополнительно способствует селективности агара MTM, позволяя изолировать N. Таким образом, принцип модифицированного агара Тайера-Мартина заключается в его селективном и обогащенном составе. Он включает в себя определенные питательные вещества, факторы роста и противомикробные агенты для создания среды, которая способствует росту патогенных штаммов Neisseria и подавляет рост других микроорганизмов, тем самым облегчая выделение и идентификацию Neisseria gonorrhoeae. Приготовление модифицированного агара Тайера-Мартина Приготовление модифицированного агара Тайера-Мартина включает несколько этапов, обеспечивающих правильное сочетание ингредиентов и стерильность. Вот пошаговая инструкция по приготовлению среды: Приготовление основы GC Agar: Добавьте компоненты основы среды ГХ в дистиллированную воду.
Доведите объем до 730. Осторожно нагрейте смесь, пока она не достигнет точки кипения. Приготовление раствора гемоглобина: Добавьте необходимое количество гемоглобина в дистиллированную воду. Доведите объем до 250. Доведите объем до 10.
Фильтр стерилизовать решение для обеспечения стерильности. Подготовка среды: Возьмите охлажденную стерильную основу GC-агара 730. В асептических условиях добавьте стерильный раствор гемоглобина 250. Добавьте в смесь 10. Тщательно перемешайте все компоненты, чтобы обеспечить равномерное распределение.
Разливают смесь в стерильные чашки Петри или распределяют по стерильным пробиркам. После заливки или распределения среды дайте ей затвердеть, а затем пометьте и храните планшеты или пробирки в соответствующих условиях. Приготовленный модифицированный агар Тайера-Мартина теперь можно использовать для выделения и культивирования Neisseria gonorrhoeae. Физические свойства модифицированного агара Тайера-Мартина Внешний вид: Однородный сыпучий порошок от кремового до желтого цвета Гелеобразование: Плотный, сравнимый с 1. Цвет и чистота приготовленной среды: TБазальная среда представляет собой гель от прозрачного до слегка опалесцирующего желтого цвета.
После добавления гемоглобина или стерильной лизированной крови и любых других ингредиентов в чашках Петри образуется непрозрачный гель шоколадного цвета. Реакция: Реакция 4. Интерпретация результатов модифицированного агара Тайера-Мартина колонии бактерий Neisseria gonorrhoeae. Интерпретация результатов на модифицированном агаре Тайера-Мартина включает наблюдение за морфологией колоний и наличием или отсутствием специфических микроорганизмов. Вот руководство по интерпретации результатов: гонококковая нейссерия: Типичная колониальная морфология: маленькие, от серовато-белых до бесцветных, слизистые колонии.
Консистенция: Гладкая. Размер: обычно 0. Нейссерии менингита: Типичная колониальная морфология: колонии от средних до крупных. Цвет: серо-голубой. Консистенция: Мукоид.
Колонии N.
На ПЖА вибриозная культура растет под поверхностью среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм. На плотной питательной среде вибрионы растут в виде нежного мелкоросинчатого налета или отдельных голубоватых колоний, заметных через лупу. Получение чистых культур получают пересевом на среду Китта-Тароцци без масла, ПЖА, сывороточный агар. Для очистки загрязненных посторонней микрофлорой культур применяют заражение беременных морских свинок путем введения им в брюшную полость или во влагалище 0,5 мл исследуемой полимикробной культуры с последующим высевом материала из абортированных плодов.
Санкт-Петербург Коломяжский проспект д.
Информация сайта защищена законом об авторских правах.
Агар Тайера Мартина: обоснование, подготовка и использование
Культуры непатогенного вида С. Оба подвида С. Наиболее частый возбудитель диарей — C. На эритрит агаре через 2 суток образуют полупрозрачные, блестящие, влажные, плоские колонии, как бы расплывающиеся по агару. При наличии подозрительных колоний на плотных питательных средах и типичного для микроаэрофилов роста на полужидких средах из культур готовят мазки, Морфология клеток кампилобактерий в культуре. В мазках из 3-5-суточных культур, выращенных на полужидких или плотных средах, преобладают длинные спирилловидные формы С. На одном или обоих концах клетки имеются жгутики. Готовят препарат «раздавленная капля» и исследуют под иммерсионой системой микроскопа.
Эффективность заявляемой питательной среды оценивали в соответствии с методическими указаниями «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза», МУ 3. Из двухсуточных культур готовили 1 млрд взвесь м. Тарасовича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000; 500; 100 м. Из каждого разведения взвеси культур высевали разовыми шприцами по 0,1 мл в 3 флакона. Через 48-72-120 ч учитывали количество выросших колоний. Пример 1.
Постановка РНАт с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Посев исследуемого материала на 4 чашки с питательной средой на бруцеллез например, эритрит агар. Постановка РНАт со смывом, после его обеззараживания. Хлороформирование животных через 24-40 ч, вскрытие, приготовление мазков-отпечатков из органов, обработка люминесцирующей сывороткой, просмотр. Одновременно, приготовление взвеси из органов на физиологическом растворе. После обеззараживания взвеси постановка РНАт. Через 2 часа выдача предварительного ответа, окончательного - через 24 часа. Реакция термоагглютинации термопреципитации Смыв двухсуточной культуры бруцелл в физиологическом растворе, густотой не менее чем 2х109 м. Результат учитывают тотчас, после прогревания и окончательный через 24 часа - при комнатной температуре. В эти сроки наступает, при наличии диссоциации, ясно выраженная агглютинация клеток бруцелл, тогда как суспензия бруцелл недиссоциированных S штаммов остается гомогенной. Метод окраски колоний кристаллическим фиолетовым основан на том, что колонии, находящиеся на разных стадиях диссоциации, окрашиваются по разному.
Определение уреазной активности C. Пробу на уреазу можно ставить в 2 вариантах — по методу Заксе а и путем посева на бульон с мочевиной б. Смесь разливают в узкие пробирки по 0,1 мл и вносят одну петлю испытуемой чистой культуры со скошенного агара или из пробирки со средой Пизу. Для выдачи ускоренного предварительного ответа, при наличии множественного роста однотипных колоний на чашке первичного посева, допускается внесение нескольких колоний в одну пробирку с пробой на уреазу. Фермент уреаза расщепляет мочевину с образованием аммиака и углекислоты. При этом повышается pH среды и происходит изменение цвета индикатора покраснение. При отсутствии у исследуемой культуры этого фермента окрашивания среды не происходит. В качестве положительного контроля в отдельную пробирку засевают контрольный штамм — C. Определение сахаролитической активности Для идентификации C. Каждую пробирку со средой Гисса инокулируют 1 петлей чистой культуры. При сбраживании того или иного углевода образуется кислота, происходит восстановление обесцвеченного фуксина, и среда приобретает малиновую окраску. В качестве положительного контроля в отдельную пробирку производится посев контрольного токсигенного штамма C. Определение нитратредуктазной активности Способность C. Затем добавляют 2—3 капли реактива на нитриты Грисса или Касаткина. В случае если произошло образование нитритов, среда окрашивается в красный цвет. Если микроорганизм не обладает нитратредуктазой, изменения окраски среды не происходит. В качестве положительного контроля в отдельную пробирку производится посев контрольного штамма C. Дополнительными тестами могут служить постановка пробы с C. Питательные среды Качество питательных сред имеет важнейшее значение при любом бактериологическом исследовании. Чтобы добиться максимальной высеваемости коринебактерий дифтерии из исследуемого материала и роста колоний, видимых невооруженным глазом через 24 ч, необходимо создать оптимальные условия для роста, размножения этих бактерий, сохранения их биологических и культурально-морфологических свойств, а также для ингибирования роста сопутствующей микрофлоры. Это достигается путем использования универсальных питательных основ с добавлением крови и теллурита калия. Теллурит калия в определенной концентрации не препятствует росту представителей рода коринебактерий и практически полностью ингибирует рост посторонней микрофлоры. Кровяные теллуритовые среды являются также дифференциально-диагностическими, поскольку колонии коринебактерий на этих средах имеют серую или черную окраску данные микроорганизмы способны восстанавливать теллурит калия до металлического теллура, вещества черного цвета, и накапливать его внутри клеток. В качестве основы для этих сред используют сухой питательный агар СПА , питательный агар на основе панкреатического гидролизата рыбной муки ГРМ , можно использовать среду АГВ, применяемую в бактериологической практике для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, однако колонии на АГВ всегда меньше по размеру, чем на других средах. Из всех перечисленных агаровых основ наиболее сбалансированным по составу является СПА. Питательные агары готовят по прописи на этикетке и ex tempore добавляют кровь или глицериновую смесь, теллурит калия. На питательных средах без крови значительно снижается высеваемость в 2—3 раза , замедляется рост колоний через 24 ч на чашках первичного посева колонии либо мелкие, либо отсутствуют, рост которых наблюдается только через 48 ч , изменяется морфология колоний, ингибирующая способность значительно ниже при замене теллурита калия на другие ингибиторы например, хинозол. Поэтому следует не применять сывороточную среду Тинсдаля ни для первичного посева материала, ни для изучения цистиназной активности, ограничить использование среды Бучина, т. Для выделения коринебактерий дифтерии выпускается также коммерческая питательная среда Коринебакагар, в которую согласно прописи по приготовлению не нужно добавлять кровь. Однако данная среда уступает кровяным средам по ингибирующей активности и ростовым свойствам образуются колонии меньшего размера на первые сутки или же они могут появляться только на вторые сутки роста. Для определения токсигенных свойств коринебактерий дифтерии выпускается коммерческая сухая среда ОТДМ и Коринетоксагар. Коммерческие среды готовят по прописи на этикетке, добавляя ex tempore нужные ингредиенты. В лабораторных условиях готовят Мартеновский пептон для приготовления Мартеновского агара, как лучшей основы для среды на токсигенность и определения цистиназы. Для отсева колоний и культивирования коринебактерий дифтерии готовят сывороточную агаровую среду. Применение свернутой сыворотки является нецелесообразным. В лабораторных условиях готовят транспортную среду для сохранения и накопления коринебактерий дифтерии, которую используют при транспортировании исследуемого материала. Коммерческого выпуска этой среды нет. Каждая новая серия питательной среды как коммерческой, так и приготовленной в лабораторных условиях подлежит бактериологическому контролю. Питательные среды для первичного посева разливают по чашкам Петри слоем 3—4 мм. Лучшей основой является Мартеновский бульон. Среду разливают в пробирки по 4 мл, стерилизуют в автоклаве при 1 атм. Принимая во внимание, что питательная среда разводится глицериновой смесью и «лаковой» кровью в 1,6 раза, при приготовлении данной среды следует увеличить навеску сухого питательного агара в 1,6 раза. Пример расчета. На этикетке флакона с сухим коммерческим питательным агаром указана навеска, необходимая для приготовления 1 л среды, например, 30 г. Для приготовления 1 л питательной основы для среды Клауберга II следует взять навеску 48 г т. Для приготовления «лаковой» крови к 34 мл стерильной дистиллированной воды добавляют 16 мл дефибринированной крови. Принимая во внимание, что питательная среда разводится кровью примерно в 1,1 раза, при приготовлении данной среды следует увеличить навеску сухого питательного агара в 1,1 раза. На этикетке флакона с сухим коммерческим питательным агаром указана навеска, необходимая для приготовления одного литра среды, например, 30 г. Для приготовления 1 л питательной основы для КТА следует взять навеску 33 г т. Методика приготовления кровяных, кровяно-теллуритовых смесей и сывороточного агара Для питательных сред используют коммерческую дефибринированную кровь крупного рогатого скота и баранью дефибринированную кровь. Можно использовать кровь животных — крупного рогатого скота, лошадей, свиней, овец, кроликов, которую собирают на мясокомбинатах или бойнях в стерильные сосуды с бусами с помощью специально смонтированной системы, соблюдая правила асептики. В отдельных случаях кровь собирают, не монтируя специальных систем, сливая первые порции крови вне бутыли. Можно использовать кровь человека с истекшим сроком годности цитратную и с консервантами , приготовив из нее специальные кровяные смеси. Для этого необходимо удалить жидкую часть отстоявшейся крови, содержащую цитрат натрия и консерванты. К оставшейся в сосуде эритроцитарной массе добавить стерильный физиологический раствор, который также можно удалить после оседания эритроцитов, и добавить дистиллированной воды до первоначального объема. Хорошим сырьем для получения кровяной смеси служит эритроцитарная масса, которая может оставаться при производстве гамма-глобулина и других препаратов крови.
Агар мясопептонный (МПА) готовый (арт. 013078)
Следует отметить, что триметоприм ингибирует рост рода Proteus и его последующее образование роя. В этом смысле антибиотики - это то, что обеспечивает селективную природу среде Тейера Мартина.. Смешайте и варите в течение 1 минуты при частом помешивании до полного растворения. Добавляйте понемногу больше воды, чтобы довести объем до 100 мл. Суспензия должна быть однородной перед стерилизацией. Стерилизовать в автоклаве в течение 15 минут. Хорошо перемешать. Количество используемого разбавителя будет указано в инструкциях к набору.. N ванкомицин, колистин, нистатин Восстановите флакон с разбавителем, предоставленным коммерческим домом. Смешайте и подавайте в стерильные чашки Петри.
Разрешить отвердеть и хранить в холодильнике до использования. Цвет приготовленной среды - вишнево-красный.
Для изоляции С. В последующих пассажах возбудитель хорошо растет в микроаэрофильных условиях. Для выращивания С. Выделенные культуры поддерживают в аэробных условиях на кровяном агаре. Культуры непатогенного вида С.
Оба подвида С. Наиболее частый возбудитель диарей — C. На эритрит агаре через 2 суток образуют полупрозрачные, блестящие, влажные, плоские колонии, как бы расплывающиеся по агару.
Модифицированный агар Тайера Мартина Взвешивают 8,2 г обезвоженной среды для ГХ и суспендируют в 100 мл. Добавьте 1 г агар-агара и добавьте 0,3 г глюкозы. Подготовьте гемоглобин и обогащающую добавку, как описано ранее. Используемая добавка для подавления - V. T ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм. Использовать Перед нанесением штрихов на образцы агар Thayer Martin необходимо дать нагреться. Используйте свежие образцы и сделайте сильные посевы на агар.
Образцы засеваются непосредственно путем выброса материала, а затем высыхания наносятся на поверхность. По окончании инкубации чашки исследуют на наличие небольших, серых и иногда слизистых колоний. Проведите грамм-тесты и подтверждающие биохимические тесты на подозрительных колониях. Во всех из них ожидается полное или частичное ингибирование в этой среде. Ограничения - Следует иметь в виду, что в среде могут расти бактерии, устойчивые к используемым ингибиторам. По этой причине рекомендуется использовать шоколадный агар с добавлением изовиталекса, но без ингибиторов. Ссылки Диагностические лаборатории Valtek. Тайер-Мартин Агар. Доступно на: com Britannia Laboratories.
Thayer—Martin agar was initially developed in 1964, with an improved formulation published in 1966.
Питательные среды
Подтверждающие тесты, такие как Окрашивание по Граму и биохимические тесты должны быть выполнены для точной идентификации штаммов Neisseria. Кроме того, после 48 часов инкубации планшет для теста на стерильность должен оставаться прозрачным, что указывает на отсутствие какого-либо микробного роста. Это важно для проверки стерильности самой среды. Интерпретацию результатов на модифицированном агаре Тайера-Мартина следует проводить путем сравнения наблюдаемой морфологии и характеристик колоний с ожидаемыми характеристиками видов Neisseria. Культура и изоляция Для культивирования и выделения Neisseria gonorrhoeae обычно выполняются следующие шаги: Сбор образцов: Уретральные или эндоцервикальные образцы собирают с помощью тампонов с пластиковыми или проволочными стержнями и наконечниками из вискозы, дакрона или альгината кальция. Тампон используется для сбора образца из соответствующего места.
Инокуляция культуральных чашек: Собранный образец инокулируют непосредственно на чашки для культивирования. Тампон наносится штрихом или прокатывается на поверхности культуральной среды. Модифицированный агар Тайера-Мартина обычно используется в качестве селективной и обогащенной среды для выделения N. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы обеспечить надлежащую инокуляцию культуральной среды. Инкубация: Планшеты с инокулированными культурами сразу же помещают в среду, обогащенную СО2.
Характеристики колонии: После инкубации чашки с культурами исследуют на предмет роста и характеристик колоний. Колонии Neisseria gonorrhoeae обычно выглядят как маленькие, непрозрачные, от серовато-белых до бесцветных, приподнятые, блестящие и гладкие колонии. Эти колонии часто описываются как имеющие слизистый или влажный вид. Важно отметить, что хотя внешний вид, описанный выше, типичен для N. Процесс культивирования и выделения позволяет выращивать и размножать N.
Контроль качества Контроль качества модифицированного агара Тайера-Мартина агар МТМ обеспечивает надежность и эффективность среды для выделения и культивирования патогенных видов Neisseria. Цвет и прозрачность приготовленной среды: Базальная среда должна образовывать гель желтого цвета, от прозрачного до слегка опалесцирующего. После добавления гемоглобина или стерильной лизированной крови и добавок среда должна образовывать непрозрачный гель шоколадного цвета в чашках Петри. Выполняя эти тесты контроля качества, лаборатории могут убедиться, что агар MTM подходит для его предполагаемой цели, обеспечивая точные и надежные результаты при выделении и идентификации патогенных штаммов Neisseria. Использование модифицированного агара Тайера-Мартина Модифицированный агар Тайера-Мартина агар МТМ имеет несколько важных применений в микробиологии, особенно при выделении и культивировании патогенных видов Neisseria.
Вот основные области применения агара MTM: Выделение видов Neisseria: Агар MTM специально разработан для селективного выделения и культивирования патогенных видов Neisseria, таких как Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitidis. Эти бактерии ответственны за инфекции, передающиеся половым путем, гонорею и менингококковый менингит соответственно. Агар MTM обеспечивает подходящую среду, которая способствует росту этих патогенных штаммов Neisseria, подавляя при этом рост других микроорганизмов, присутствующих в клинических образцах. Подавляя рост нежелательных организмов, агар MTM позволяет изолировать и идентифицировать патогенные штаммы Neisseria из образцов, которые могут содержать смешанную бактериальную и грибковую флору. Выращивание видов Neisseria: В дополнение к изоляции агар MTM обеспечивает богатую и насыщенную питательными веществами среду, которая поддерживает рост и культивирование видов Neisseria.
Агаровая основа, наряду с включением казеина и мясных пептонов, обеспечивает необходимые азотистые питательные вещества для роста бактерий. Обогащение гемоглобином и IsoVitaleX обеспечивает необходимые факторы роста, такие как фактор X гемин и фактор V никотинамидадениндинуклеотид, НАД , соответственно, которые необходимы для оптимального роста видов Neisseria. Диагностические цели: Агар MTM широко используется в клинических микробиологических лабораториях для диагностики инфекций Neisseria. Выделяя и идентифицируя патогенные штаммы Neisseria, агар помогает в подтверждении гонореи и менингококковых инфекций. Дальнейшее тестирование, такое как тестирование чувствительности к противомикробным препаратам, может быть выполнено на выделенных бактериях, чтобы принять соответствующие решения о лечении.
Политика cookie Политика обработки персональных данных XДанный веб-сайт использует cookies и похожие технологии для улучшения работы и эффективности сайта. Для того чтобы узнать больше об использовании cookies на данном веб-сайте, прочтите Политику использования файлов Cookie и похожих технологий.
Пластины должны храниться в упаковке для предотвращения высыхания и загрязнения. Проведение анализа Подготовить пробу, следуя стандартным методикам для конкретного типа образца вода, молоко и т. Внести пробу на пластину с мясо-пептонным агаром, используя стерильные инструменты. После инкубации оценить рост микроорганизмов на пластине, определяя количество и вид колоний. Регистрация результатов Записать общее количество колоний для количественной оценки.
Наиболее частым осложнением менингококковой инфекции является менингит или менингоэнцефалит воспаление мозговых оболочек. Инкубационный период — 5 - 7 дней. Гной с мозговых оболочек стекает к основанию черепа и проникает в спинномозговой канал. Основные симптомы менингита связаны с поражением мозговых оболочек и развитием общей интоксикации: быстрый подъемом температуры, озноб, сильная головная боль, рвота. Иммунитет: после заболевания остается стойкий иммунитет. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: кровь, спинномозговая жидкость. Спинномозговую жидкость центрифугируют. Методы диагностики: 1 бактериоскопический: изосадка делают мазок и окрашивают по Граму. Типичные нейссерии располагаются внутри нейтрофилов; 2 бактериологический: посев исследуемого материала сразу после взятия крови на кровяной агар, агар с ристомицином подавляет рост сопутствующей микрофлоры , агар Мартена агар с антибиотиками ; 3 серологический: с надосадочной жидкостью ставят реакцию преципитации. Используется пенициллин, левомицетин рифампицин.
Бактериологическая диагностика кампилобактериоза
Агар Цейсслера – в форме круглой пуговицы или листа винограда колонии с зоной гемолиза. МакКонки агар без кристаллического фиолетового. 51036 1 упак. в пищевых продуктах Среда №9 Среда №10 Среда №11 Агар на пивном сусле Среда с дрожжевым экстрактом Агар голодный пшеничный Кукурузный агар. Для получения НФ вибрионы в течение трех часов выращивали на 0,3% агаре Мартена, рН 7,6 с последующим пересевом на 2% агар Мартена, рН 7,7-7,8. Через 18 часов. Применение: Culture среда for the detection и enumeration общие и faecal Coliforms · Библиография: Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook Микробиол. Мартина агар. Мартина агар. (W.М.В. Martin, англ. бактериолог XIX—XX вв.) Мартена пептон. Мартина индекс.
Среды питательные, Бульоны
| Возбудители менингита, туберкулеза и дифтерии | В бульон Хоттингера, подогретый до температуры 50-60°С, вносят мелко нарезанный хорошо промытый агар из расчета (по мере необходимости) 15,0-25,0 г на 1000,0 мл. |
| Простые среды для культивирования бактерий | + 6. Бульон Мартена рН 7,6. |
| Обучающие материалы для медсестер | Агары предварительно расплавляют в кипящей водяной бане и разливают в чашки Петри слоем 4-5 мм. |
| Приготовление питательных сред. Мясопептонный бульон Мясо пептонный | крови или сыворотки крови, на 2%-ный мясо-печеночный пептонный агар, агар Мартена. |
| - Advances in current natural sciences | Культивирование проводят в анаэростате. Полужидкий агар для строгих анаэробов (Тароцци). В бульон Мартена (рН 7,2-7,4) с 0,3-0,5% глюкозы добавляют 0,1% агара. |
Приготовление питательных сред. Мясопептонный бульон Мясо пептонный
агар Тайера-Мартина (или среда Тайера-Мартина, или агар VPN) представляет собой агар Мюллера-Хинтона с 5% шоколадной овечьей крови и антибиотиками. Мясопептонный полужидкий агар готовят так же, как и МПА; различие заключается в том, что агар-агара добавляют меньше — 0,15 0,25 %. Им же предложен первый отвердитель –– желатин, как компонент плотной среды. Привычный для современных микробиологов агар-агар был внедрен Фростом в повседневную практику.
U.S. Food and Drug Administration
Например, среда для длительного сохранения микроорганизма в лабораторных условиях заметно отличается от сред, предназначенных для получения тех или иных продуктов обмена веществ. Однако какой полноценной ни была бы среда, ее компоненты могут остаться недоступными, если активная кислотность среды рН не соответствует значениям, при которых возможно развитие изучаемых микроорганизмов. Основу многих питательных сред животного происхождения составляет мясная вода. Обычные простые среды.
Мясопептонный бульон МПБ — жидкая питательная среда. Мясопептонный полужидкий агар готовят так же, как и МПА; различие заключается в том, что агар-агара добавляют меньше — 0,15...
Приготовленный модифицированный агар Тайера-Мартина теперь можно использовать для выделения и культивирования Neisseria gonorrhoeae. Физические свойства модифицированного агара Тайера-Мартина Внешний вид: Однородный сыпучий порошок от кремового до желтого цвета Гелеобразование: Плотный, сравнимый с 1. Цвет и чистота приготовленной среды: TБазальная среда представляет собой гель от прозрачного до слегка опалесцирующего желтого цвета. После добавления гемоглобина или стерильной лизированной крови и любых других ингредиентов в чашках Петри образуется непрозрачный гель шоколадного цвета.
Реакция: Реакция 4. Интерпретация результатов модифицированного агара Тайера-Мартина колонии бактерий Neisseria gonorrhoeae. Интерпретация результатов на модифицированном агаре Тайера-Мартина включает наблюдение за морфологией колоний и наличием или отсутствием специфических микроорганизмов. Вот руководство по интерпретации результатов: гонококковая нейссерия: Типичная колониальная морфология: маленькие, от серовато-белых до бесцветных, слизистые колонии. Консистенция: Гладкая. Размер: обычно 0.
Нейссерии менингита: Типичная колониальная морфология: колонии от средних до крупных. Цвет: серо-голубой. Консистенция: Мукоид. Колонии N. Вокруг колоний не должно быть обесцвечивания среды. Важно отметить, что эти наблюдения специфичны для видов Neisseria и могут незначительно варьироваться в зависимости от штамма и других факторов.
Подтверждающие тесты, такие как Окрашивание по Граму и биохимические тесты должны быть выполнены для точной идентификации штаммов Neisseria. Кроме того, после 48 часов инкубации планшет для теста на стерильность должен оставаться прозрачным, что указывает на отсутствие какого-либо микробного роста. Это важно для проверки стерильности самой среды. Интерпретацию результатов на модифицированном агаре Тайера-Мартина следует проводить путем сравнения наблюдаемой морфологии и характеристик колоний с ожидаемыми характеристиками видов Neisseria. Культура и изоляция Для культивирования и выделения Neisseria gonorrhoeae обычно выполняются следующие шаги: Сбор образцов: Уретральные или эндоцервикальные образцы собирают с помощью тампонов с пластиковыми или проволочными стержнями и наконечниками из вискозы, дакрона или альгината кальция. Тампон используется для сбора образца из соответствующего места.
Инокуляция культуральных чашек: Собранный образец инокулируют непосредственно на чашки для культивирования. Тампон наносится штрихом или прокатывается на поверхности культуральной среды. Модифицированный агар Тайера-Мартина обычно используется в качестве селективной и обогащенной среды для выделения N. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы обеспечить надлежащую инокуляцию культуральной среды. Инкубация: Планшеты с инокулированными культурами сразу же помещают в среду, обогащенную СО2. Характеристики колонии: После инкубации чашки с культурами исследуют на предмет роста и характеристик колоний.
Колонии Neisseria gonorrhoeae обычно выглядят как маленькие, непрозрачные, от серовато-белых до бесцветных, приподнятые, блестящие и гладкие колонии. Эти колонии часто описываются как имеющие слизистый или влажный вид. Важно отметить, что хотя внешний вид, описанный выше, типичен для N.
Пример 3. Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе патоке рафинадной пример 2. Таким образом, на основании вышеизложенного можно сказать о явных преимуществах предлагаемой питательной среды, состоящей из патоки рафинадной 20,0, дрожжевого экстракта 5,0, натрия хлорида 5,0, натрия фосфорнокислого двузамещенного 4,0, метабисульфита натрия 0,3, агара микробиологического 12,0, водопроводной воды. Питательная среда технически проста в приготовлении без предварительного этапа подготовки основы.
Предлагаемая среда дешевле, так как в основу берется растительное сырье и для ее приготовления не требуется дистиллированной воды, среда готовится на водопроводной воде.
В настоящее время бактериологические лаборатории широко используют сухие питательные среды в виде порошков, хранящихся в герметически закрытых банках и пакетах. Готовят среды по прописи, указанной на этикетке, навеску порошка растворяют в определенном объеме дистиллированной воды, среду разливают в пробирки и стерилизуют при соответствующей температуре. Для определения рН плотных питательных сред их расплавляют. Определяют pH с использованием pH-метров или менее точно с помощью индикаторной бумаги. Следует учитывать, что после стерилизации среда становится более кислой. Плотные питательные среды Питательные свойства плотной среды зависят исключительно от состава питательного бульона, из которого она изготовлена путем добавления агар-агара или желатины.
Последние служат как желирующие вещества для создания плотности среды. Концентрация агара в большой степени зависит от качества агар-агара. Поэтому при употреблении новой партии агара необходимо проверить его желирующую способность. Если агар влажный, его следует до употребления подсушить. Кастрюлю с бульоном и агаром ставят на огонь и кипятят до полного растворения агара. Во время кипячения необходимо все время помешивать во избежание пригорания. По окончании кипячения следует восстановить объем среды добавлением горячей дистиллированной воды. Проверяют и, если нужно, исправляют реакцию.
В противном случае агар или желатина очень быстро становятся плотными, что затрудняет определение. После установления реакции агар кипятят. Дают ему отстояться в теплом месте, после чего фильтруют в горячем состоянии через ватно-марлевый фильтр. Осадок на фильтр не выливают. Разливают в посуду, стерилизуют под давлением 1 атм. Текучим паром можно варить агар также в текучепаровом аппарате. Затем оставляют для медленного и равномерного отстаивания в теплом месте можно оставить в автоклаве с потушенной горелкой на 1 час, после чего проверяют реакцию, исправляют ее и фильтруют. Можно после отстаивания дать агару застыть и на другой день срезать и удалить нижнюю его часть с осадком.
Если после расплавления срезанного агара в нем будет заметна муть, дают ему вновь отстояться в теплом месте, после чего осторожно сливают с осадка. Надо избегать подщелачивания готового агара, так как не исключена возможность выпадения осадка после подщелачивания при последующей стерилизации. Прозрачный и светлый агар получают также путем просветления его яичным белком или кровяной сывороткой. Яичный белок нужно предварительно хорошо размешать с двойным объемом холодной воды. Употребляют только свежие яйца, в противном случае агар может сделаться еще более мутным. После прибавления белка или сыворотки агар тщательно размешивают и кипятят 10-15 минут на огне. Добавленный белок свертывается и адсорбирует взвешенные частицы. Крупно хлопчатый осадок легко отделяется фильтрованием.
Фильтрованный агар разливают в посуду, стерилизуют в автоклаве под давлением 1 атм. После стерилизации питательный агар, разлитый в пробирки, оставляют застыть столбиком, если он приготовлен не для немедленного использования, или скашивают косой агар для непосредственного употребления. Для скашивания пробирки с горячим агаром укладывают на покатой поверхности или под верхнюю часть пробирок подкладывают резиновую или стеклянную трубку. После остывания на агаровой среде собирается конденсационная жидкость, которая сохраняется некоторое время, если среду хранить в прохладном месте. Рост микробов на влажном агаре лучше, чем на сухом. Последний следует расплавить и дать ему снова застыть, тогда выделится снова конденсационная вода. Однако многократное кипячение агара и особенно стерилизация снижают его плотность. Для разливки в чашки Петри пользуются агаром из флаконов или пробирок.
Чашки Петри должны быть стерильны. Срок годности чашек со средой до 48 часов. Хранить их следует на холоду. Сухие питательные среды В последние годы в бактериологии широко пользуются сухими питательными средами. Это избавляет лаборатории от громоздкого процесса приготовления обычных сред, позволяет получать сравнимые результаты в разных лабораториях и, наконец, приближает к разрешению вопроса о стандартности питательных сред. Значение сухих сред возрастает в экспедиционных и полевых условиях.
Классификация питательных сред
| Агар Тайера-Мартина - Thayer-Martin agar - | 10 г/л тщательно очищенного агар-агара после установления рН среды. |
| Мартена агар - ООО Лабстар | ДНК хромосом выделяли путем кипя-чения в дистиллированной воде микробных взвесей культур, выращенных на агаре Мартена (рН 7,7) при 37 °С в течение 1 сут. |